Diseño y aplicaciones de vectores de terapia génica para la mucopolisacaridosis en Colombia
Investigadores de la Pontificia Universidad Javeriana de Colombia describen la construcción de vectores derivados virales para el uso en la terapia génica de las enfermedades de almacenamiento de muchopolisacáridos (MPS), especialmente en el síndrome de Morquio A.
Las motivaciones para emprender esa línea de investigación hace unos veinte años fue la creencia de que la terapia génica era el tratamiento más plausible para las enfermedades monogénicas debido al efecto transitorio y su dificultad para alcanzar el tejido óseo del único tratamiento efectivo en uso, la terapia de reemplazo enzimático.
La estrategia utilizada para aumentar la orientación ósea fue incluir en los vectores un octapéptido de ácido aspártico que aumenta su afinidad por la molécula de hueso de hidroxiapatita de carga opuesta. También se discuten las dificultades para hacer investigación de primera línea en muchos países en desarrollo, debido a la creencia generalizada de que su dinero para la investigación debe dedicarse principalmente a proyectos que ofrecen soluciones en muy poco tiempo.
Sin embargo, los autores argumentan a favor de hacer investigación en terapia génica, ya que está demostrando ser la solución para muchas enfermedades monogénicas, y por lo tanto hay una necesidad de personas con un buen dominio de GT en todo el mundo, para poder hacer las cosas bien. uso de esa terapia especialmente para tratamientos ex-vivo.
La enfermedad de Morquio A es la mucopolisaca-ridosis con mayor número de casos reportados en el país. De hecho, Colombia podría ser el segundo país, después de Brasil, con el mayor número de pacientes afectados por esta enfermedad en Latinoamérica. A pesar de que la terapia de reemplazo enzimático para la enfermedad de Morquio A comenzará sus ensayos clínicos en el 2008 (http://www.morquio.com), es necesario continuar evaluando otras alternativas que permitan mantener niveles terapéuticos de la enzima por un periodo prolongado y con la que se logre corregir el defecto en la mayor cantidad de tejidos posibles.
En este estudio se evaluó la capacidad de vectores derivados de virus adenoasociados para corregir in vitro la deficiencia de la enzima lisosómica GALNS. Previamente se había construido el vector pIRESneo2-IDS, que porta el ADNc de la enzima lisosómica iduronato-2-sulfato sulfatasa, con el que se logró mantener, durante un mes en fibroblastos MPS II, la expresión de la enzima con valores cercanos al 70% de la actividad encontrada en células no afectadas (31). Empleando la metodología desarrollada en ese estudio, se construyó el vector de expresión episómica pIRESneo2-GALNS, el cual contiene el ADNc de GALNS bajo el control del promotor e intensificador temprano del citomegalovirus, además de otras secuencias que incrementan la estabilidad del ARNm.
A pesar de que los vectores de tipo AAV no son no patógenos para los humanos, el principal riesgo para su uso es la contaminación con adenovirus durante el proceso de producción (14). Por tal motivo, se seleccionó el método de producción de virus asociados al ADN recombinantes (rAAV) libre de adenovirus desarrollado por X. Xiao et al. (14), en el cual las secuencias que codifican para las proteínas de la cápside (Cap), las que regulan la replicación y empaquetamiento (Rep) y las secuencias adenoviruales necesarias para la producción de virus asociados al ADN, son suministradas en trans por los vectores pXX2 y pXX6, mientras que el casete de expresión, flanqueado por los ITR, es suministrado en un vector derivado de pSUB201. Las secuencias adenovirales restantes son proporcionadas por la línea celular HEK293, razón por la cual esta línea celular fue seleccionada para la producción de las partículas virales. El empleo de este sistema permitió obtener rAAV libres de virus ayudadores, sin la necesidad de pasos adicionales para la remoción de estos virus altamente inmunogénicos.
FUENTE: SCIELO
Las motivaciones para emprender esa línea de investigación hace unos veinte años fue la creencia de que la terapia génica era el tratamiento más plausible para las enfermedades monogénicas debido al efecto transitorio y su dificultad para alcanzar el tejido óseo del único tratamiento efectivo en uso, la terapia de reemplazo enzimático.
La estrategia utilizada para aumentar la orientación ósea fue incluir en los vectores un octapéptido de ácido aspártico que aumenta su afinidad por la molécula de hueso de hidroxiapatita de carga opuesta. También se discuten las dificultades para hacer investigación de primera línea en muchos países en desarrollo, debido a la creencia generalizada de que su dinero para la investigación debe dedicarse principalmente a proyectos que ofrecen soluciones en muy poco tiempo.
Sin embargo, los autores argumentan a favor de hacer investigación en terapia génica, ya que está demostrando ser la solución para muchas enfermedades monogénicas, y por lo tanto hay una necesidad de personas con un buen dominio de GT en todo el mundo, para poder hacer las cosas bien. uso de esa terapia especialmente para tratamientos ex-vivo.
La enfermedad de Morquio A es la mucopolisaca-ridosis con mayor número de casos reportados en el país. De hecho, Colombia podría ser el segundo país, después de Brasil, con el mayor número de pacientes afectados por esta enfermedad en Latinoamérica. A pesar de que la terapia de reemplazo enzimático para la enfermedad de Morquio A comenzará sus ensayos clínicos en el 2008 (http://www.morquio.com), es necesario continuar evaluando otras alternativas que permitan mantener niveles terapéuticos de la enzima por un periodo prolongado y con la que se logre corregir el defecto en la mayor cantidad de tejidos posibles.
En este estudio se evaluó la capacidad de vectores derivados de virus adenoasociados para corregir in vitro la deficiencia de la enzima lisosómica GALNS. Previamente se había construido el vector pIRESneo2-IDS, que porta el ADNc de la enzima lisosómica iduronato-2-sulfato sulfatasa, con el que se logró mantener, durante un mes en fibroblastos MPS II, la expresión de la enzima con valores cercanos al 70% de la actividad encontrada en células no afectadas (31). Empleando la metodología desarrollada en ese estudio, se construyó el vector de expresión episómica pIRESneo2-GALNS, el cual contiene el ADNc de GALNS bajo el control del promotor e intensificador temprano del citomegalovirus, además de otras secuencias que incrementan la estabilidad del ARNm.
A pesar de que los vectores de tipo AAV no son no patógenos para los humanos, el principal riesgo para su uso es la contaminación con adenovirus durante el proceso de producción (14). Por tal motivo, se seleccionó el método de producción de virus asociados al ADN recombinantes (rAAV) libre de adenovirus desarrollado por X. Xiao et al. (14), en el cual las secuencias que codifican para las proteínas de la cápside (Cap), las que regulan la replicación y empaquetamiento (Rep) y las secuencias adenoviruales necesarias para la producción de virus asociados al ADN, son suministradas en trans por los vectores pXX2 y pXX6, mientras que el casete de expresión, flanqueado por los ITR, es suministrado en un vector derivado de pSUB201. Las secuencias adenovirales restantes son proporcionadas por la línea celular HEK293, razón por la cual esta línea celular fue seleccionada para la producción de las partículas virales. El empleo de este sistema permitió obtener rAAV libres de virus ayudadores, sin la necesidad de pasos adicionales para la remoción de estos virus altamente inmunogénicos.
FUENTE: SCIELO
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